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可以建设一个网站,普通网站要什么费用,注册公司如何提供注册地址,开发公司房屋移交物业邻近连接技术#xff08;PLA#xff09;是一种高灵敏度、高特异性的蛋白质检测技术#xff0c;可在单分子水平原位分析蛋白质互作或翻译后修饰。其核心原理是#xff1a;当两个目标蛋白#xff08;或修饰位点#xff09;间距40 nm时#xff0c;偶联特异性抗体的PLUS…邻近连接技术PLA是一种高灵敏度、高特异性的蛋白质检测技术可在单分子水平原位分析蛋白质互作或翻译后修饰。其核心原理是当两个目标蛋白或修饰位点间距40 nm时偶联特异性抗体的PLUS/MINUS DNA探针会相互靠近经连接酶催化形成环状DNA模板再通过滚环扩增RCA添加荧光信号。该技术广泛应用于信号通路研究、疾病诊断等领域尤其适合FFPE组织样本和临床微量检测。背景说明邻近连接技术Proximity Ligation AssayPLA是一种基于抗体识别与DNA扩增的高灵敏度蛋白质检测技术其核心原理是通过空间邻近依赖的DNA连接与扩增将蛋白质相互作用或翻译后修饰事件转化为可定量的荧光信号。具体原理可分为以下关键步骤1双抗体识别使用一对特异性抗体分别针对目标蛋白A和B或同一蛋白的不同修饰位点抗体分别偶联一条独特的单链DNA探针PLUS和MINUS探针。当两个靶标在空间上邻近 40 nm时其携带的DNA探针末端得以靠近2DNA连接与环化探针末端的互补序列在连接酶催化下共价结合形成闭环DNA模板。这一步骤具有高度特异性当两靶标真实互作时才会触发。3信号放大与检测闭环DNA通过滚环扩增RCA生成包含数百重复单元的DNA产物再与荧光标记或酶标探针杂交形成离散的荧光信号点每点代表单个互作事件。这种指数级信号放大使PLA可检测单分子水平的目标蛋白。图 邻近连接技术PLA原理Wang et al., 2015。服务流程客户在线下单——两个蛋白互作生信评估——IF预实验——正式实验细胞爬片制备——一抗体孵育——PLA探针孵育——连接酶扩增——RCA扩增——荧光显微镜或共聚焦显微镜拍照、分析服务内容及说明适用范围1、检测细胞或组织中的蛋白弱互作PLA技术通过DNA信号放大可检测传统方法难以捕获的低亲和力或瞬时蛋白互作如激酶-底物结合、信号通路的短暂激活。2、检测细胞或组织中的蛋白翻译后修饰利用双抗体策略一抗识别目标蛋白另一抗识别修饰位点如磷酸化、泛素化实现PTM的原位可视化。3、定位蛋白互作的发生区域结合其它细胞器marker及免疫荧光技术可定位蛋白互作的发生位置。4、临床病理诊断用于肿瘤分子分型如EGFR磷酸化激活状态和免疫治疗生物标志物检测技术优势1、超高灵敏度滚环扩增实现信号放大1000倍可解析 40 nm范围内的蛋白弱互作完美适配低丰度蛋白互作研究。2、原位捕捉蛋白互作直接在细胞/组织原位捕获互作事件保留亚细胞定位信息如膜受体簇集、核内修饰位点分辨率达40 nm。3、高特异性需双抗体 双DNA探针同时结合靶标距离 40 nm才能触发信号有效规避抗体非特异性吸附导致的假阳性尤其适合复杂样本如肿瘤微环境分析。4、样本友好适用于多种样本如FFPE组织、穿刺活检等微量样本可兼容IF/FISH等其他标记技术为精准医疗提供分子病理新工具。实验流程1样本处理用多聚甲醛固定处理好的细胞爬片。2封闭将封闭液滴加到细胞爬片确保封闭液均匀覆盖整个组织区域。3孵育一抗将稀释好的一抗均匀滴加在已封闭的细胞爬片放入湿盒中37 °C孵育使一抗与抗原充分结合。4孵育PLA探针再次清洗后加入PLUS和MINUS两种PLA探针。5连接反应滴加连接缓冲液含连接酶将载玻片置于预热的湿盒中37 °C下进行连接反应。6扩增及成像清洗掉连接缓冲液加入扩增缓冲液含聚合酶并使用荧光显微镜观察两个目的蛋白之间的相互作用情况。客户下单及项目信息填写在我司官网http://www.biorun.com/进行注册或登录请客户按照页面提示填写1、项目名称、选择项目类型、填写个人信息及联系方式进行预提交2、提交项目所需要的具体信息细胞样本、目标蛋白及对应的一抗等。实验信息实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户并发送实验报告查看网址。实验结题后实验报告检测结果可在线查看或打印并永久保留。实验周期致电详询实验交付内容①荧光照片组合图;②PLA信号统计结果;③详细的实验结题报告。我司案例细胞样本蛋白A和蛋白B强互作检测细胞样本蛋白A和蛋白B弱互作检测细胞样本蛋白A和蛋白B互作线粒体定位组织切片样本蛋白A和蛋白B互作检测参考文献Wang S, Yoo S H, Kim H, et al. Detection of in situ protein-protein complexes at the Drosophila larval neuromuscular junction using proximity ligation assay[J].Journal of visualized experiments: JoVE, 2015 (95): 52139.